免疫组化：非特异性染色的八大可能

自体组化，自体一个组织化学新科技（immunohistochemistry），是一项透过蛋白质自体反应，通过使标有自体的盐类剂盐类来确定一个组织细胞膜蛋白质，对蛋白定位，定性的科学研究新科技。

非自体染的八大情况

然而，结果却显然都是那么如意的，经常显现示意图这种状况，好好的一张一新片染得脏脏的，这就是最典型的非自体染。

1. 自体补救设法，知道是一分钱一分货啊！

一抗用多他的团队自体较易显现非自体染，劝告用二氧化钛，高效价的针对更具自体蛋白质决定簇的HIV来补救。HIV很茂，不过结果知道很好。特别是背景非自体染可能会太深。就让一分价钱一分货。一抗已确定也会引发杯具，所以要注意自体的有效期。

2. 自体含量过高/孵育星期太短

一抗含量太高也是显现非自体染的典型情况。补救的设法就是预科学研究。每次使用一新自体同一时间应该多要用预科学研究，琢磨出zui全然的文书工作含量，不能简单地按照说明书来用。另一个典型情况就是孵育星期太短。补救的设法就是计时器。加上自体后，立即调好计时器，警醒自己及时告一段落反应，就会避免这个补救设法。

3. DAB染星期太长/硫化物

DAB的孵育星期太短，会引发背景非自体染。DAB的盐类星期不是一成不变的，主要靠自己在电子显微镜下抱着，一旦显现浅浅的红褐色的时候，就要马上冲沾。显现红褐色的星期太长，表明自体含量过高；显现红褐色的星期太短，表明自体含量过低。DAB要保存于避光潮湿的之外，现用现配，临用同一时间才加入H2O2。图1就冲沾的有些稍早了；图2就是刚刚好，染效果棒棒哒!

4. 人体内肽和生物素

人体内肽和生物素也会引发非自体染，除此以外是一些人体内肽生物素含量丰富的一个组织，如肾脏，消化道，肾脏等。处理过程的设法为：灭活碱性磷酸肽：zui常用的步骤是将N-哌啶（24 mg/mL）加入位点液中，并保有PH值在7.6-8.2，即能除去大部分人体内碱性磷酸肽；对于酸性磷酸肽，可以用50 mmol/L的丙酮消除；对于人体内过氧化物肽，可以用0.9%的双氧水来灭活。对于人体内生物素，染同一时间将腌渍浸于25 μg/mL亲和素氯化钠中15分钟，PBS清沾15分钟后均可染。也可以24 mg/mL的卵白素封片15分钟。

5. 一个组织变干

一下子染太多一新片的时候，较易显现这种上述情况。补救的设法就是不要贪多嚼不烂。一次少染几张。还有就是试剂更进一步覆盖一个组织，远超一个组织边缘2 mm。然后用PAP笔在一个组织周围画作一个圈圈，把复建液圈在里面。避免复建液流走回。圈圈应该距离一个组织边缘3-4 mm。

6. 浸入星期太短

腌渍在缓冲液或复建液里面浸入留宿，也会引起杯具。这都是偷懒的要用法。但是有时候也是可以偷一下懒的。毛博的独门秘技就是4°C冰箱。只要把容器放置4°C冰箱里，留宿基本上无法补救设法。

7. 清沾不更进一步

清沾一定要更进一步。PBS液一定要双蒸水一新配，用以后再次测PH值。缓冲液用0.05 mol/L的Tris-HCL，0.15 mol/L的NaCl均可。如果加一点去垢剂Tween-20就更快了。

8. 阻塞肾脏补救设法

是否选项了正确的阻塞肾脏。原则上是选项二抗动物的非自体肾脏，例如二抗是羊抗兔，就要选项非自体羊肾脏。用PBS挥发为3-10%的氯化钠孵育腌渍，37°C 10-30分钟。这里不用沾，实际上甩掉均可。毛博再功绩一个独门绝招，实际上用奶粉也可以。用5%的脱脂奶粉就可以了。而且效果还差强人意。怎么样？简单吧。